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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海新手RNA提取試劑盒****,RNA提取試劑盒
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RNA提取注意事項(xiàng)(4)
消除環(huán)境RNase的污染
為了得到完整的、***RNA,上海新手RNA提取試劑盒****,在整個(gè)RNA制備過(guò)程中,當(dāng)RNA離開強(qiáng)蛋白變性劑(如離液裂解液或酚)的保護(hù)時(shí),避免引入新的RNase污染就非常關(guān)鍵。由于RNase幾乎是無(wú)所不在,所以必須確保與純化的RNA接觸的每一樣?xùn)|西都是無(wú)RNase污染的。所有的表面,包括移液器、工作臺(tái)、玻璃器皿和制膠設(shè)備,都必須用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來(lái)處理過(guò),去除各種溶液或者反應(yīng)緩沖液中可能存在的RNase污染,可以用RNAsafe。必須保證一直使用無(wú)RNase的移液器頭、試管和溶液,上海新手RNA提取試劑盒****,手套也應(yīng)經(jīng)常更換。 并助推基因快速診斷進(jìn)入基層醫(yī)療體系,上海新手RNA提取試劑盒****。目前,公司已經(jīng)研發(fā)出從樣本采集、核酸提取、一步建庫(kù)。上海新手RNA提取試劑盒****
客戶提供: 1.需檢測(cè)的細(xì)胞或組織樣品,2.目的基因信息,3. 目的蛋白信息 4.WB一抗及抗體信息。**終交付:1.原始數(shù)據(jù)、結(jié)果圖片 2. 詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含實(shí)驗(yàn)步驟、試劑耗材等) 3.蛋白質(zhì)譜報(bào)告。
RNA/DNA pull-down是檢測(cè)RNA/DNA結(jié)合蛋白與其靶RNA/DNA之間相互作用的主要實(shí)驗(yàn)手段之一。用生物素標(biāo)記RNA/DNA 探針,與胞漿蛋白提取液孵育,形成RNA/DNA—蛋白質(zhì)復(fù)合物。該復(fù)合物可與鏈親和素標(biāo)記的磁珠結(jié)合從而與孵育液中的其他成分分離。復(fù)合物洗脫后,通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特定的RNA/DNA結(jié)合蛋白是否與RNA/DNA相互作用,還可以對(duì)該蛋白進(jìn)行質(zhì)譜(MS)鑒定蛋白質(zhì)類型。 江蘇快速RNA提取試劑盒***的選擇取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細(xì)胞裂解液,混勻后室溫放置10分鐘。
RNA提取注意事項(xiàng)(5)
純化得到的RNA可能需要通過(guò)沉淀來(lái)濃縮,以滿足一些下游應(yīng)用的需要。醋酸銨(NH4OAc) 沉淀(加0.1體積的5 M 醋酸銨、2-2.5體積的無(wú)水乙醇,-20°C放置25分鐘以上)可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低濃度的RNA(ng/ml),可以采用共沉淀(如linear acrylamide糖原glycogen,、酵母yeast RNA )的方法。核酸助沉劑是linear acrylamide,當(dāng)RNA用于RT-PCR分析時(shí),線性的丙烯酰胺和DNase處理的糖原都可以作為理想的共沉淀劑,因?yàn)樗鼈兌疾缓珼NA污染,糖原含量高會(huì)制抑PCR反應(yīng)。酵母RNA和未處理的糖原會(huì)給樣品帶來(lái)核酸污染,有可能影響RT-PCR的結(jié)果。沉淀后,注意避免RNA沉淀過(guò)分干燥,因?yàn)檫@可能導(dǎo)致很難重新溶解。
樣品處理
組織:將組織在液氮中磨碎。每 50–100 mg 組織加1 ml 溶液 RL,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)裂解液RZ 體積的十分之一。
單層培養(yǎng)細(xì)胞:直接在培養(yǎng)板中加入裂解液RZ 裂解細(xì)胞,每10 cm2 面積加1 ml溶液 RL。用取樣器抽打幾次。
注意:溶液 RL 的加入量根據(jù)培養(yǎng)瓶面積決定,不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果加量不足,可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。
細(xì)胞懸液:離心取細(xì)胞,棄上清。每5–10×106 動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞加入1 ml 溶液 RL。加溶液 RL 前不要洗滌細(xì)胞,以免降解mRNA。
將勻漿樣品在15–30℃放置5 min,使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。 所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品,操作過(guò)程要小心,帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。
懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,吸盡液體,每5×106-1×107 個(gè)細(xì)胞加入1ml Trizol, 再用移液器反復(fù)吹打?!咀ⅰ考尤?Trizol 前應(yīng)避免洗滌細(xì)胞,會(huì)增加 mRNA 降解的可能性。
c. 動(dòng)、植物組織:取-80°C 凍存的組織在液氮中充分研磨后加入適量的Trizol混勻;或者取新鮮動(dòng)物或植物組織盡量剪碎,然后加入適量的 Trizol 進(jìn)行勻漿處理。
將勻漿樣品劇烈震蕩后在室溫條件下放置 5 分鐘以使**白體完全裂解?!咀ⅰ看瞬讲荒苁÷裕瑫r(shí)間可以長(zhǎng)于 5 分鐘。
(可選步驟)4°C,12000rpm 離心 10 分鐘,取上清?!咀ⅰ咳绻麡悠分泻休^多蛋白、脂肪、多糖等可離心除去。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜、多糖、高分子量的 DNA 等物質(zhì),上清中含有 RNA。處理脂肪組織樣品時(shí),上層是大量油脂, 應(yīng)除去,然后再取澄清的勻漿溶液進(jìn)行下一步的操作。 生物科學(xué)(和生物學(xué)不同),研究生物的結(jié)構(gòu)、生理行為和生物起源、進(jìn)化與遺傳發(fā)育等。上海四步完成RNA提取試劑盒***的選擇
12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。上海新手RNA提取試劑盒****
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