其中Kataoka M 等發(fā)現(xiàn)來源于根*農(nóng)桿菌的L-泛解酸內(nèi)酯水解酶有較高的活力和選擇性。Kesseler M 等對根*農(nóng)桿菌lu678 的L-泛解酸內(nèi)酯水解酶構(gòu)建大腸工程菌并過量表達該蛋白，酶活提高了200 倍，達到600 U/g。該過程要求L-泛解酸內(nèi)酯必須完全水解，D-泛酸鈣泛解酸內(nèi)酯應(yīng)用注意事項，才能獲得高光學純度的D-泛解酸內(nèi)酯，限制了其工業(yè)應(yīng)用。D-泛解酸內(nèi)酯水解酶選擇性水解拆分DL-泛解酸內(nèi)酯生成D-泛解酸，再經(jīng)內(nèi)酯化生成D-泛解酸內(nèi)酯， 留下的L-泛解酸內(nèi)酯經(jīng)化學消旋化為DL-泛解酸內(nèi)酯重新循環(huán)拆分。D-泛解酸內(nèi)酯水解酶來源豐富，其中**常用的是鐮飽霉菌，D-泛酸鈣泛解酸內(nèi)酯應(yīng)用注意事項，有尖孢鐮刀菌、腐皮鐮刀菌和串珠鐮刀菌。2007 年，D-泛酸鈣泛解酸內(nèi)酯應(yīng)用注意事項，SAKAMOTO K等利用固定化的尖孢鐮刀菌來水解拆分DL-泛解酸內(nèi)酯， 固定化細胞的半衰期可以達到6 000h，經(jīng)過180次重復(fù)利用后仍然保持原活力的71%，相對于游離的整細胞催化其半衰期提高了35 倍。

篩選到一株產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶的串珠鐮孢霉菌(Fusarium moniliforme SW902).產(chǎn)酶條件研究表明,用甘油作碳源,蛋白胨作氮源,初始pH8.0,溫度26℃,搖瓶培養(yǎng)3 d,產(chǎn)酶量比較高.在60L和1000L發(fā)酵罐中通風發(fā)酵45～47h,產(chǎn)酶量為6～8g干菌體/L,D-泛解酸內(nèi)酯水解酶酶活力達到0.87～0.92IU/g干菌體.該酶的**適反應(yīng)溫度為55℃,**適反應(yīng)pH為7.0～7.5.在酶不對稱水解泛解酸內(nèi)酯過程中,對溶液加酶量5%～10%,底物濃度10%～20%,控制水解率20%～30%,水解效果比較好。

“微生物酶法拆分制備D－泛解酸內(nèi)酯及用于生產(chǎn)D-泛酸鈣與D-泛醇”項目選育了一株能高產(chǎn)立體專一性D-泛解酸內(nèi)酯水解酶、不利用不降解泛解酸內(nèi)酯或泛解酸的微生物菌株串珠鐮孢霉，建立了國際**的霉菌交聯(lián)原位固定化方法，酶轉(zhuǎn)化時間短到3～5小時，效率高，反復(fù)分批酶轉(zhuǎn)化可達180次以上，所得到的酶水解產(chǎn)物光學純度達到99％e．e．以上，因此具有較好的技術(shù)經(jīng)濟競爭力。該項目采用的D-泛酸鈣生產(chǎn)能力微生物酶催化拆分方法，與傳統(tǒng)化學拆分方法相比，以生產(chǎn)D-泛醇為例，原材料消耗減少69．2％，廢液、廢渣排放分別減少65．5％、43．8％，能耗減少12．7％，生產(chǎn)成本降低了26．5％，同時，生物法改善了操作環(huán)境，提高了產(chǎn)品品質(zhì)與產(chǎn)品安全性，提高了D-泛酸生產(chǎn)的整體技術(shù)水平，達到了用高新生物技術(shù)改造傳統(tǒng)化學工業(yè)的目的。

文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/310133.html