將D-泛解酸內(nèi)酯水解酶cDNA結(jié)構(gòu)基因分別插入到大腸桿菌胞內(nèi)表達(dá)載體pTrc99a和分泌表達(dá)載體pET20b中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pTrc99a-LAC和pET20b-LAC.將重組載體pTrc99a-LAC轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109.重組菌在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)出有活性的重組酶,經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè),重組大腸桿菌有分子量約為40 kD的蛋白表達(dá)帶,重組酶活力平均為39 U/克濕細(xì)胞.將分泌重組載體pET20b-LAC轉(zhuǎn)化大腸桿菌BLR(DE3)pLysS，98以上泛解酸內(nèi)酯推薦產(chǎn)品,利用IPTG對(duì)重組菌進(jìn)行誘導(dǎo)，98以上泛解酸內(nèi)酯推薦產(chǎn)品,D-泛解酸內(nèi)酯水解酶被分泌表達(dá)至大腸桿菌的周質(zhì)空間，98以上泛解酸內(nèi)酯推薦產(chǎn)品,信號(hào)肽被正確識(shí)別切下后,獲得活性的D-泛解酸內(nèi)酯。D-泛解酸內(nèi)酯

D-泛酸鈣，維生素 B5，是輔酶 A 的前體，參與碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪的代謝作用，是 人體和動(dòng)物維持正常生理機(jī)能不可或缺、不可替代的物質(zhì)，是一種重要的飼料添 加劑和食品添加劑。

D-泛醇，維生素原 B5，是一種優(yōu)異的皮膚與頭發(fā)保護(hù)劑，主要用于食品、醫(yī)藥、化妝品 行業(yè)液體制劑的添加劑和營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑。

泛酸俗稱維生素B5，是輔酶A 合成的前體。而D-泛解酸內(nèi)酯是D-泛酸合成的前體。D-泛解酸內(nèi)酯的化學(xué)合成是以甲醛和異丁醛為起始原料。經(jīng)醛縮合、腈化及內(nèi)酯化等反應(yīng)生成DL-泛解酸內(nèi)酯。再經(jīng)選擇性拆分得到D-泛解酸內(nèi)酯?；瘜W(xué)法與酶法相結(jié)合有助于***、綠色地合成高光學(xué)純度的D-泛解酸內(nèi)酯。內(nèi)酯水解酶催化混旋泛解酸內(nèi)酯的選擇性拆分已經(jīng)成功地實(shí)現(xiàn)了工業(yè)生產(chǎn)。

微生物選擇性的不對(duì)稱水解DL-泛解酸內(nèi)酯中的D-泛解酸內(nèi)酯，得到D-泛解酸，再將D-泛解酸進(jìn)行內(nèi)酯化生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯。該方法工藝控制簡(jiǎn)單，微生物酶專一性好，可以得到高光學(xué)純度的D-泛解酸內(nèi)酯。

利用D-泛解酸內(nèi)酯水解酶N末端序列,并根據(jù)NCBI中公布的D-泛解酸內(nèi)酯水解酶cDNA序列設(shè)計(jì)了一個(gè)特異引物,該引物結(jié)合Oligo(dT)15,以串珠鐮孢霉(Fusarium moniliforme)CGMCC 0536 mRNA反轉(zhuǎn)錄得到的總cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增,獲得約1.5kb左右的片段,將其克隆到T載體上進(jìn)行測(cè)序,對(duì)測(cè)得的序列進(jìn)行分析,重新設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,并在引物兩端分別加上限制酶EcoRI和SalI的識(shí)別位點(diǎn)序列,利用熱啟動(dòng)PCR成功地?cái)U(kuò)增出了D-泛解酸內(nèi)酯水解酶基因,

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