該酶已經成功的應用于工業(yè)化,取得了很好的綜合效益.為了提高D-泛解酸內酯水解酶的酶活力及在低pH條件下的穩(wěn)定性,我們在基因水平上對酶進行了研究. 利用RT-PCR方法,擴增得到了編碼源于串珠鐮孢霉菌(Fusarium moniliforme)CGMCC

0536的D-泛解酸內酯水解酶cDNA,對其結構進行分析,根據(jù)分析結果設計了一對特異引物，低水分泛解酸內酯來電咨詢,成功擴增到了編碼D-泛解酸內酯水解酶cDNA的結構基因，低水分泛解酸內酯來電咨詢,結構基因同pMD18-T載體連接后,進行測序，低水分泛解酸內酯來電咨詢.D-泛解酸內酯水解酶cDNA結構基因序列已在Genebank數(shù)據(jù)庫申請登記,登記號為AY728018.

一種高純度的D?泛酸內酯的合成方法包括步驟:將DL?泛酸內酯加入到水中,在pH為6.0?8.0用酶水解,得到D?泛解酸以及L?泛酸內酯;將上述水溶液經有機溶劑萃取,得到D?泛解酸的水溶液以及L?泛酸內酯有機溶液;將D?泛解酸的水溶液,控溫20?80℃反應,用酸調節(jié)pH至1?4,然后關環(huán)得到D?泛酸內酯水溶液;將步驟S3所得的D?泛酸內酯水溶液經有機溶劑萃取,然后經濃縮,蒸餾,結晶得到D?泛酸內酯;將步驟S2所得的L?泛酸內酯溶液經濃縮、然后在堿性條件下消旋得到DL?泛酸內酯。本發(fā)明為泛酸鈣制備得到D?泛酸內酯,工藝路線操作簡單,反應條件溫和,安全,環(huán)保,原料價廉易得,工業(yè)適應性強。

選擇6種吸附樹脂和離子交換樹脂對D-泛解酸內酯水解酶進行固定化,篩選出了固定化效果較好的大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂D-380為載體,用先吸附后交聯(lián)的方法固定化。通過實驗對固定化條件進行了優(yōu)化,得出比較好的固定化條件為:加酶量6 U/g樹脂、吸附pH 7.5、吸附時間4 h、吸附溫度30℃、交聯(lián)劑戊二醛終濃度0.1%、交聯(lián)時間2 h。實驗表明在此條件下制得的固定化酶有很好的穩(wěn)定性:固定化酶在連續(xù)20次的底物水解反應后,剩余酶活達到71%。當溫度達到80℃時游離酶幾乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活為60%以上。游離酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH 7～8,而固定化酶為pH 6.5～8.5。

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