需求數(shù)量:0
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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:D泛解酸內(nèi)酯高質(zhì)量的選擇
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詳細(xì)說明
D-泛酸鈣的制備方法主要有兩種:1)先化學(xué)合成DL-泛酸鈣,通過拆分DL-泛酸鈣而制得D-泛酸鈣。2)通過化學(xué)法或生物法拆分關(guān)鍵中間體DL-泛解酸內(nèi)酯得到D-泛解酸內(nèi)酯,再由D-泛解酸內(nèi)酯與β--氨基丙酸反應(yīng)合成D-泛酸鈣,其中生物法拆分的成本比化學(xué)法拆分的成本低15%,D泛解酸內(nèi)酯高質(zhì)量的選擇。
國外D-泛酸鈣生產(chǎn)公司主要有日本制藥精細(xì)化學(xué)品公司、德國BASF公司,D泛解酸內(nèi)酯高質(zhì)量的選擇,D泛解酸內(nèi)酯高質(zhì)量的選擇、荷蘭DSM公司等。BASF、DSM均采用化學(xué)法生產(chǎn),而日本***制藥采用生物法酶拆分工藝制備中間體D-泛解酸內(nèi)酯,這也是目前**技術(shù)的工藝。國內(nèi)原只有鑫富藥業(yè)一家有生物法酶拆分工藝,但現(xiàn)在山東新發(fā)也采用了這一工藝。
選擇6種吸附樹脂和離子交換樹脂對D-泛解酸內(nèi)酯水解酶進(jìn)行固定化,篩選出了固定化效果較好的大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂D-380為載體,用先吸附后交聯(lián)的方法固定化。通過實驗對固定化條件進(jìn)行了優(yōu)化,得出比較好的固定化條件為:加酶量6 U/g樹脂、吸附pH 7.5、吸附時間4 h、吸附溫度30℃、交聯(lián)劑戊二醛終濃度0.1%、交聯(lián)時間2 h。實驗表明在此條件下制得的固定化酶有很好的穩(wěn)定性:固定化酶在連續(xù)20次的底物水解反應(yīng)后,剩余酶活達(dá)到71%。當(dāng)溫度達(dá)到80℃時游離酶幾乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活為60%以上。游離酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH 7~8,而固定化酶為pH 6.5~8.5。
該酶已經(jīng)成功的應(yīng)用于工業(yè)化,取得了很好的綜合效益.為了提高D-泛解酸內(nèi)酯水解酶的酶活力及在低pH條件下的穩(wěn)定性,我們在基因水平上對酶進(jìn)行了研究. 利用RT-PCR方法,擴增得到了編碼源于串珠鐮孢霉菌(Fusarium moniliforme)CGMCC
0536的D-泛解酸內(nèi)酯水解酶cDNA,對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,根據(jù)分析結(jié)果設(shè)計了一對特異引物,成功擴增到了編碼D-泛解酸內(nèi)酯水解酶cDNA的結(jié)構(gòu)基因,結(jié)構(gòu)基因同pMD18-T載體連接后,進(jìn)行測序.D-泛解酸內(nèi)酯水解酶cDNA結(jié)構(gòu)基因序列已在Genebank數(shù)據(jù)庫申請登記,登記號為AY728018.
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/362788.html
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