化學(xué)法與水解酶拆分法相結(jié)合合成D-泛解酸內(nèi)酯憑借其成熟的工藝。目前在工業(yè)生產(chǎn)中占據(jù)***重要地位。隨著國內(nèi)環(huán)保要求的日益趨嚴(yán)以及產(chǎn)能擴(kuò)大帶來的競爭壓力，升級D-泛解酸內(nèi)酯的合成工藝勢在必行。諸多的研究表明，微生物或者酶的應(yīng)用有助于***，高含量泛解酸內(nèi)酯高質(zhì)量的選擇、綠色地合成高光學(xué)純度的D-泛解酸內(nèi)酯。內(nèi)酯水解酶催化混旋泛解酸內(nèi)酯的選擇性拆分已經(jīng)成功地實(shí)現(xiàn)了工業(yè)生產(chǎn)。

而羰基還原酶、醇脫氫酶和羥基腈裂合酶等也已在化學(xué)酶法合成D-泛解酸內(nèi)酯方面展現(xiàn)出了巨

大的應(yīng)用潛力。后續(xù)利用基因工程，高含量泛解酸內(nèi)酯高質(zhì)量的選擇、蛋白質(zhì)工程以及反應(yīng)工程等技術(shù)，高含量泛解酸內(nèi)酯高質(zhì)量的選擇，提高酶的表達(dá)量，改善酶的催化性能，優(yōu)化催化反應(yīng)條件，必將進(jìn)一步提升化學(xué)酶法合成D-泛解酸內(nèi)酯的技術(shù)競爭力。

選擇6種吸附樹脂和離子交換樹脂對D-泛解酸內(nèi)酯水解酶進(jìn)行固定化,篩選出了固定化效果較好的大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂D-380為載體,用先吸附后交聯(lián)的方法固定化。通過實(shí)驗對固定化條件進(jìn)行了優(yōu)化,得出比較好的固定化條件為:加酶量6 U/g樹脂、吸附pH 7.5、吸附時間4 h、吸附溫度30℃、交聯(lián)劑戊二醛終濃度0.1%、交聯(lián)時間2 h。實(shí)驗表明在此條件下制得的固定化酶有很好的穩(wěn)定性:固定化酶在連續(xù)20次的底物水解反應(yīng)后,剩余酶活達(dá)到71%。當(dāng)溫度達(dá)到80℃時游離酶幾乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活為60%以上。游離酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH 7～8,而固定化酶為pH 6.5～8.5。

水解酶催化選擇性拆分制備D-泛解酸內(nèi)酯DL-泛解酸內(nèi)酯可經(jīng)手性拆分得到所需要的D-泛解酸內(nèi)酯?；瘜W(xué)法拆分所需的化學(xué)拆分劑或結(jié)晶操作一般較為昂貴， 而利用水解酶催化的動力學(xué)拆分， 具有節(jié)能環(huán)保、產(chǎn)品光學(xué)純度高等優(yōu)點(diǎn)，更適用于工業(yè)生產(chǎn)。水解酶選擇性水解泛解酸內(nèi)酯，根據(jù)選擇性可分為L-泛解酸內(nèi)酯水解酶和D-泛解酸內(nèi)酯水解酶。DL-泛解酸內(nèi)酯經(jīng)L-泛解酸內(nèi)酯水解酶水解，留下D-泛解酸內(nèi)酯，產(chǎn)生的L-泛解酸再經(jīng)化學(xué)內(nèi)酯、外消旋轉(zhuǎn)為DL-泛解酸內(nèi)酯。已知的L-泛解酸內(nèi)酯水解酶，大多來源于細(xì)菌，如多形無色桿菌、蘇云金芽孢桿菌、放射性土壤桿菌、根*農(nóng)桿菌。

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