選擇6種吸附樹(shù)脂和離子交換樹(shù)脂對(duì)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶進(jìn)行固定化,篩選出了固定化效果較好的大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹(shù)脂D-380為載體,用先吸附后交聯(lián)的方法固定化。通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)固定化條件進(jìn)行了優(yōu)化,得出比較好的固定化條件為:加酶量6 U/g樹(shù)脂、吸附pH 7.5、吸附時(shí)間4 h、吸附溫度30℃，哪里有泛解酸內(nèi)酯性?xún)r(jià)比高企業(yè)、交聯(lián)劑戊二醛終濃度0，哪里有泛解酸內(nèi)酯性?xún)r(jià)比高企業(yè).1%、交聯(lián)時(shí)間2 h。實(shí)驗(yàn)表明在此條件下制得的固定化酶有很好的穩(wěn)定性:固定化酶在連續(xù)20次的底物水解反應(yīng)后，哪里有泛解酸內(nèi)酯性?xún)r(jià)比高企業(yè),剩余酶活達(dá)到71%。當(dāng)溫度達(dá)到80℃時(shí)游離酶幾乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活為60%以上。游離酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH 7～8,而固定化酶為pH 6.5～8.5。

微生物選擇性的不對(duì)稱(chēng)水解DL-泛解酸內(nèi)酯中的D-泛解酸內(nèi)酯，得到D-泛解酸，再將D-泛解酸進(jìn)行內(nèi)酯化生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯。該方法工藝控制簡(jiǎn)單，微生物酶專(zhuān)一性好，可以得到高光學(xué)純度的D-泛解酸內(nèi)酯。

利用D-泛解酸內(nèi)酯水解酶N末端序列,并根據(jù)NCBI中公布的D-泛解酸內(nèi)酯水解酶cDNA序列設(shè)計(jì)了一個(gè)特異引物,該引物結(jié)合Oligo(dT)15,以串珠鐮孢霉(Fusarium moniliforme)CGMCC 0536 mRNA反轉(zhuǎn)錄得到的總cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增,獲得約1.5kb左右的片段,將其克隆到T載體上進(jìn)行測(cè)序,對(duì)測(cè)得的序列進(jìn)行分析,重新設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,并在引物兩端分別加上限制酶EcoRI和SalI的識(shí)別位點(diǎn)序列,利用熱啟動(dòng)PCR成功地?cái)U(kuò)增出了D-泛解酸內(nèi)酯水解酶基因,

傳統(tǒng)的生產(chǎn)方法是化學(xué)拆分法或鈣鹽誘導(dǎo)結(jié)晶法。化學(xué)拆分的缺點(diǎn)是拆分劑太貴，分離困難，步驟多，成本高，還0性和環(huán)境污染問(wèn)題。鈣鹽誘導(dǎo)結(jié)晶法步驟多，收率低，投資大，擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模比較困難。另外，誘導(dǎo)結(jié)晶法不能用于D－泛醇等泛酸衍生物生產(chǎn)。

“微生物酶法拆分制備D－泛解酸內(nèi)酯及用于生產(chǎn)D－泛酸鈣與D－泛醇”項(xiàng)目選育了一株能高產(chǎn)立體專(zhuān)一性D－泛解酸內(nèi)酯水解酶、不利用不降解泛解酸內(nèi)酯或泛解酸的微生物菌株串珠鐮孢霉，建立了國(guó)際**的霉菌交聯(lián)原位固定化方法，酶轉(zhuǎn)化時(shí)間短到3～5小時(shí)，效率高，反復(fù)分批酶轉(zhuǎn)化可達(dá)180次以上，所得到的酶水解產(chǎn)物光學(xué)純度達(dá)到99％e．e．以上，因此具有較好的技術(shù)經(jīng)濟(jì)競(jìng)爭(zhēng)力。

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