醇脫氫酶參與的化學酶法合成D-泛解酸內(nèi)酯與D- 泛解酸內(nèi)酯的工業(yè)合成類似， 從縮醛反應(yīng)出發(fā)再經(jīng)醇脫氫酶還原， *經(jīng)過三步就合成了D- 泛解酸內(nèi)酯。這種醇脫氫酶參與的化學酶法合成過程由德國比勒費爾德大學HEIDLINDEMANN M 等在2015 年設(shè)計以異丁醛和乙醛酸乙酯為起始原料， 以L-組氨酸作為有機催化劑在酸性條件下發(fā)生醛醛縮合反應(yīng)，得到(R)-中間體1，藥用級泛解酸內(nèi)酯來電咨詢。醇脫氫酶以異丙醇為輔底物實現(xiàn)輔酶循環(huán)，將中間體1 還原成中間體2，中間體2 無需分離直接自發(fā)環(huán)化成D-泛解酸內(nèi)酯。反應(yīng)中D-泛解酸內(nèi)酯的總得率達55%，藥用級泛解酸內(nèi)酯來電咨詢，產(chǎn)物e，藥用級泛解酸內(nèi)酯來電咨詢.e.值達到95%。

其中Kataoka M 等發(fā)現(xiàn)來源于根*農(nóng)桿菌的L-泛解酸內(nèi)酯水解酶有較高的活力和選擇性。Kesseler M 等對根*農(nóng)桿菌lu678 的L-泛解酸內(nèi)酯水解酶構(gòu)建大腸工程菌并過量表達該蛋白，酶活提高了200 倍，達到600 U/g。該過程要求L-泛解酸內(nèi)酯必須完全水解，才能獲得高光學純度的D-泛解酸內(nèi)酯，限制了其工業(yè)應(yīng)用。D-泛解酸內(nèi)酯水解酶選擇性水解拆分DL-泛解酸內(nèi)酯生成D-泛解酸，再經(jīng)內(nèi)酯化生成D-泛解酸內(nèi)酯， 留下的L-泛解酸內(nèi)酯經(jīng)化學消旋化為DL-泛解酸內(nèi)酯重新循環(huán)拆分。D-泛解酸內(nèi)酯水解酶來源豐富，其中**常用的是鐮飽霉菌，有尖孢鐮刀菌、腐皮鐮刀菌和串珠鐮刀菌。2007 年，SAKAMOTO K等利用固定化的尖孢鐮刀菌來水解拆分DL-泛解酸內(nèi)酯， 固定化細胞的半衰期可以達到6 000h，經(jīng)過180次重復(fù)利用后仍然保持原活力的71%，相對于游離的整細胞催化其半衰期提高了35 倍。

選擇6種吸附樹脂和離子交換樹脂對D-泛解酸內(nèi)酯水解酶進行固定化,篩選出了固定化效果較好的大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂D-380為載體,用先吸附后交聯(lián)的方法固定化。通過實驗對固定化條件進行了優(yōu)化,得出比較好的固定化條件為:加酶量6 U/g樹脂、吸附pH 7.5、吸附時間4 h、吸附溫度30℃、交聯(lián)劑戊二醛終濃度0.1%、交聯(lián)時間2 h。實驗表明在此條件下制得的固定化酶有很好的穩(wěn)定性:固定化酶在連續(xù)20次的底物水解反應(yīng)后,剩余酶活達到71%。當溫度達到80℃時游離酶幾乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活為60%以上。游離酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH 7～8,而固定化酶為pH 6.5～8.5。

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