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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:DL泛解酸內(nèi)酯源頭好貨
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采用異丁醛、甲醛和**為原料經(jīng)過(guò)化學(xué)合成獲得DL-泛解酸內(nèi)酯;
采用酶拆分工藝制備中間體D-泛解酸內(nèi)酯是目前**技術(shù)的工藝。
D-泛解酸內(nèi)酯是合成D-泛酸的重要中間體。
DL-泛解酸內(nèi)酯再在串珠鐮孢霉菌的作用下生成D-泛解酸,經(jīng)內(nèi)酯化獲得D-泛解酸內(nèi)酯,DL泛解酸內(nèi)酯源頭好貨。
在培養(yǎng)基中培養(yǎng)尖孢鐮孢菌,在培養(yǎng)后的尖孢鐮孢菌與底物混合,DL泛解酸內(nèi)酯源頭好貨,水解得到D-泛解酸,DL泛解酸內(nèi)酯源頭好貨。
內(nèi)酯化獲得D-泛解酸內(nèi)酯,但是本方法采用發(fā)酵制備D-泛解酸內(nèi)酯的過(guò)程能耗較高,且產(chǎn)率低,工業(yè)成本較高。
其中Kataoka M 等發(fā)現(xiàn)來(lái)源于根*農(nóng)桿菌的L-泛解酸內(nèi)酯水解酶有較高的活力和選擇性。Kesseler M 等對(duì)根*農(nóng)桿菌lu678 的L-泛解酸內(nèi)酯水解酶構(gòu)建大腸工程菌并過(guò)量表達(dá)該蛋白,酶活提高了200 倍,達(dá)到600 U/g。該過(guò)程要求L-泛解酸內(nèi)酯必須完全水解,才能獲得高光學(xué)純度的D-泛解酸內(nèi)酯,限制了其工業(yè)應(yīng)用。D-泛解酸內(nèi)酯水解酶選擇性水解拆分DL-泛解酸內(nèi)酯生成D-泛解酸,再經(jīng)內(nèi)酯化生成D-泛解酸內(nèi)酯, 留下的L-泛解酸內(nèi)酯經(jīng)化學(xué)消旋化為DL-泛解酸內(nèi)酯重新循環(huán)拆分。D-泛解酸內(nèi)酯水解酶來(lái)源豐富,其中**常用的是鐮飽霉菌,有尖孢鐮刀菌、腐皮鐮刀菌和串珠鐮刀菌。2007 年,SAKAMOTO K等利用固定化的尖孢鐮刀菌來(lái)水解拆分DL-泛解酸內(nèi)酯, 固定化細(xì)胞的半衰期可以達(dá)到6 000h,經(jīng)過(guò)180次重復(fù)利用后仍然保持原活力的71%,相對(duì)于游離的整細(xì)胞催化其半衰期提高了35 倍。
羥基腈裂合酶催化不對(duì)稱(chēng)合成D-泛解酸內(nèi)酯前體(R)-氰醇(R)-氰醇是D-泛解酸內(nèi)酯的前體物質(zhì),可經(jīng)過(guò)水解生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯。利用(R)-羥基腈裂合酶催化HCN 與羥基特戊醛的羰基碳不對(duì)稱(chēng)加成進(jìn)而合成(R)-氰醇。大多數(shù)參與醇腈化反應(yīng)的酶主要存在于高等植物中,例如巴旦杏、蘋(píng)果、薔薇、橡膠樹(shù)、亞麻類(lèi)等,在植物體內(nèi)羥基腈裂解酶催化形成氫腈酸從而抵御外來(lái)物種的入侵。2007 年荷蘭DSM 公司從巴旦杏中提取分離的(R)-羥基腈裂合酶能選擇性合成(R)-氰醇,并構(gòu)建了粟酒裂殖酵母工程菌。2014 年,DSM 公司將來(lái)自薔薇科的(R)-羥基腈裂合酶基因構(gòu)建于pJET 重組質(zhì)粒, 并導(dǎo)入巴斯德酵母中表達(dá), 確定了該重組酶**適條件范圍為15~20 ℃以及pH 2.5~3.0。在15 ℃和pH 2.5 下醇腈化反應(yīng)2 d,反應(yīng)收率達(dá)到93%,轉(zhuǎn)化率達(dá)**,產(chǎn)物光學(xué)純度達(dá)92%。
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