將D-泛解酸內酯水解酶cDNA結構基因分別插入到大腸桿菌胞內表達載體pTrc99a和分泌表達載體pET20b中,構建重組質粒pTrc99a-LAC和pET20b-LAC.將重組載體pTrc99a-LAC轉化大腸桿菌JM109.重組菌在IPTG誘導下表達出有活性的重組酶,經(jīng)SDS-PAGE檢測,重組大腸桿菌有分子量約為40 kD的蛋白表達帶,重組酶活力平均為39 U/克濕細胞.將分泌重組載體pET20b-LAC轉化大腸桿菌BLR(DE3)pLysS，D+泛解酸內酯銷售電話，D+泛解酸內酯銷售電話,利用IPTG對重組菌進行誘導,D-泛解酸內酯水解酶被分泌表達至大腸桿菌的周質空間，D+泛解酸內酯銷售電話,信號肽被正確識別切下后,獲得活性的D-泛解酸內酯。D-泛解酸內酯

D-泛酸在生物體內的代謝途徑已經(jīng)確定，即經(jīng)α-酮異戊酸，利用酮泛解酸羥甲基轉移酶生成酮泛解酸，再利用酮泛解酸還原酶形成泛解酸，***與β-丙氨酸形成D-泛酸。目前，國內對維生素B5 的年需求量達2 000 t 以上，而全球年需求量達10 000 t以上

化學法合成D-泛解酸內酯，從低廉原料出發(fā)經(jīng)多步反應合成，工藝成熟，但總體存在化學條件

嚴苛、酸堿用量大和能耗較高等問題。生物技術的發(fā)展為生物酶法合成D-泛解酸內酯提供了充分的可行性。目前工業(yè)化合成D-泛解酸內酯采用的是化學法與水解酶拆分法相結合的技術路線。

選擇6種吸附樹脂和離子交換樹脂對D-泛解酸內酯水解酶進行固定化,篩選出了固定化效果較好的大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂D-380為載體,用先吸附后交聯(lián)的方法固定化。通過實驗對固定化條件進行了優(yōu)化,得出比較好的固定化條件為:加酶量6 U/g樹脂、吸附pH 7.5、吸附時間4 h、吸附溫度30℃、交聯(lián)劑戊二醛終濃度0.1%、交聯(lián)時間2 h。實驗表明在此條件下制得的固定化酶有很好的穩(wěn)定性:固定化酶在連續(xù)20次的底物水解反應后,剩余酶活達到71%。當溫度達到80℃時游離酶幾乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活為60%以上。游離酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH 7～8,而固定化酶為pH 6.5～8.5。

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