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產品關鍵詞:酶法泛解酸內酯合成,泛解酸內酯
***更新:2020-07-04 08:25:17
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詳細說明
篩選到一株產D-泛解酸內酯水解酶的串珠鐮孢霉菌(Fusarium moniliforme SW902).產酶條件研究表明,用甘油作碳源,蛋白胨作氮源,初始pH8.0,溫度26℃,搖瓶培養(yǎng)3 d,產酶量比較高.在60L和1000L發(fā)酵罐中通風發(fā)酵45~47h,酶法泛解酸內酯合成,產酶量為6~8g干菌體/L,D-泛解酸內酯水解酶酶活力達到0.87~0.92IU/g干菌體,酶法泛解酸內酯合成.該酶的**適反應溫度為55℃,**適反應pH為7,酶法泛解酸內酯合成.0~7.5.在酶不對稱水解泛解酸內酯過程中,對溶液加酶量5%~10%,底物濃度10%~20%,控制水解率20%~30%,水解效果比較好。婦孕嬰兒的食品中一般均添加泛酸。酶法泛解酸內酯合成
一種高純度的D?泛酸內酯的合成方法包括步驟:將DL?泛酸內酯加入到水中,在pH為6.0?8.0用酶水解,得到D?泛解酸以及L?泛酸內酯;將上述水溶液經有機溶劑萃取,得到D?泛解酸的水溶液以及L?泛酸內酯有機溶液;將D?泛解酸的水溶液,控溫20?80℃反應,用酸調節(jié)pH至1?4,然后關環(huán)得到D?泛酸內酯水溶液;將步驟S3所得的D?泛酸內酯水溶液經有機溶劑萃取,然后經濃縮,蒸餾,結晶得到D?泛酸內酯;將步驟S2所得的L?泛酸內酯溶液經濃縮、然后在堿性條件下消旋得到DL?泛酸內酯。本發(fā)明為泛酸鈣制備得到D?泛酸內酯,工藝路線操作簡單,反應條件溫和,安全,環(huán)保,原料價廉易得,工業(yè)適應性強。l-泛解酸內酯型號食品加工領域將D-泛酸鈣用于制作各種營養(yǎng)保健品。
將D-泛解酸內酯水解酶cDNA結構基因分別插入到大腸桿菌胞內表達載體pTrc99a和分泌表達載體pET20b中,構建重組質粒pTrc99a-LAC和pET20b-LAC.將重組載體pTrc99a-LAC轉化大腸桿菌JM109.重組菌在IPTG誘導下表達出有活性的重組酶,經SDS-PAGE檢測,重組大腸桿菌有分子量約為40 kD的蛋白表達帶,重組酶活力平均為39 U/克濕細胞.將分泌重組載體pET20b-LAC轉化大腸桿菌BLR(DE3)pLysS,利用IPTG對重組菌進行誘導,D-泛解酸內酯水解酶被分泌表達至大腸桿菌的周質空間,信號肽被正確識別切下后,獲得活性的D-泛解酸內酯。D-泛解酸內酯
醇脫氫酶參與的化學酶法合成D-泛解酸內酯與D- 泛解酸內酯的工業(yè)合成類似, 從縮醛反應出發(fā)再經醇脫氫酶還原, *經過三步就合成了D- 泛解酸內酯。這種醇脫氫酶參與的化學酶法合成過程由德國比勒費爾德大學HEIDLINDEMANN M 等在2015 年設計以異丁醛和乙醛酸乙酯為起始原料, 以L-組氨酸作為有機催化劑在酸性條件下發(fā)生醛醛縮合反應,得到(R)-中間體1。醇脫氫酶以異丙醇為輔底物實現輔酶循環(huán),將中間體1 還原成中間體2,中間體2 無需分離直接自發(fā)環(huán)化成D-泛解酸內酯。反應中D-泛解酸內酯的總得率達55%,產物e.e.值達到95%。D-泛解酸內酯的工業(yè)制備是由DL-泛解酸內酯拆分而來的。
早在1973 年,KING H L 等就研究發(fā)現一種來源于釀酒酵母的NADP(H)依賴型的酮泛解酸還原酶能夠將酮泛解酸還原為D-泛解酸內酯,該酶在pH 7.0 條件下需要2.2 min 反應延滯期才會催化酮泛解酸內酯形成D-泛解酸內酯。1984 年,日本學者SHIMIZU S 等篩選了一系列能夠還原酮泛解酸內酯形成泛解酸內酯的微生物菌種,其中小紅酵母、不對稱擲孢酵母、**滑假絲酵母、粟酒裂殖酵母、清酒酵母、黑曲霉和萱草絲衣霉菌能夠催化酮泛解酸內酯形成D-泛解酸內酯。1987 年SHIMIZU S等利用氧化還原系統(tǒng)從消旋化的泛解酸內酯出發(fā),經諾卡式菌選擇性氧化L-泛解酸內酯生成酮泛解酸內酯, 后者經**滑假絲酵母不對稱還原成D-泛解酸內酯。氫氰酸作為泛酸系列的關鍵中間體D-泛解酸內酯的重要原料。l-泛解酸內酯型號
D-泛酸鈣世界市場年消費量約30000噸。酶法泛解酸內酯合成
選擇6種吸附樹脂和離子交換樹脂對D-泛解酸內酯水解酶進行固定化,篩選出了固定化效果較好的大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂D-380為載體,用先吸附后交聯的方法固定化。通過實驗對固定化條件進行了優(yōu)化,得出比較好的固定化條件為:加酶量6 U/g樹脂、吸附pH 7.5、吸附時間4 h、吸附溫度30℃、交聯劑戊二醛終濃度0.1%、交聯時間2 h。實驗表明在此條件下制得的固定化酶有很好的穩(wěn)定性:固定化酶在連續(xù)20次的底物水解反應后,剩余酶活達到71%。當溫度達到80℃時游離酶幾乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活為60%以上。游離酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH 7~8,而固定化酶為pH 6.5~8.5。酶法泛解酸內酯合成
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文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/489589.html
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